Changes of ultrastructure in the lymphocytic malignancies
LIU Xin-yue
(Hematology Institute of Tongji Medical University,Wuhan 430022)
PENG Xiao-lian
(Hematology Institute of Tongji Medical University,Wuhan 430022)
HU Jian-shi
(Hematology Institute of Tongji Medical University,Wuhan 430022)
YUAN You-bing
(Department of Pathology,Tongji Medical University,Wuhan)
Abstract Objective:To further define the ultrastructural features of the lymphocytic malignancies.Method:A morphometric analysis was performed on a large number of cells from each disease group which induded acute lymphoblastic leukemia (ALL),B-chronic lymphocytic leukemia (B-CLL),large granular lymphocytic leukemia (LGLL),T-prolymphocytic leukemia (T-PLL),Hairy cell leukemia (HCL),Splenic lymphoma with villous lymphocytes (SLVL),leukemia/lymphoma and multiple myeloma (MM).Result:Transmission electron microscopy (TEM) permited a more precise assessment of the cell morphologies than light microscopy (LM).Conclusion:The morphometric findings provid an objective morphological basis for the differentiating diagnosis between these closely related disorders.
Key words Ultrastructure Lymphocytic malignancy Morphometric feature Transmission electron microscopy
在透射电镜(TEM)下对一组淋巴源性肿瘤进行了形态学观察。旨在确立某些疾病时电镜下的特征性改变；借助电镜识别不典型或重叠病例，从而评估电镜检查在淋巴源性肿瘤诊断中的作用。
1 资料与方法
1.1 临床资料
淋巴源性肿瘤患者22例(均为我院门诊及住院患者)，其中男19例，女3例；平均年龄46.8岁。急性淋巴细胞白血病(ALL)6例，B细胞-慢性淋巴细胞白血病(B-CLL)6例，大颗粒淋巴细胞白血病(LGLL)1例，T细胞-幼淋巴细胞白血病(T-PLL)1例，毛细胞白血病(HCL)3例，伴绒毛淋巴细胞脾淋巴瘤(SLVL)2例，白血病-淋巴瘤2例，多发性骨髓瘤(MM)1例。
1.2 方法
1.2.1 细胞免疫表型检测：B系列单克隆抗体(单抗)包括HLA-DR、CD10、CD19、CD22、CD20、CD11c、
CD25；T系列单抗包括CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8等。单抗采自Becton Dickison产品，采用APAAP免疫荧光标记。
1.2.2 TEM检测：标本采自患者骨髓，制备方法按文献〔1〕进行。
2 结果
2.1 ALL组
3例T-ALL的淋巴细胞呈中等大小，胞浆较少，细胞边缘光滑，个别细胞有少数短绒毛突起(平均0.6 μm)。胞浆可见线粒体、溶酶体颗粒，罕见内浆网，尚见少量脂肪滴。大多数细胞核不规则，有的呈脑回形，异染色质较少，散在核内，核仁小且不明显。
3例B-ALL的淋巴细胞胞浆含有较多多核糖体、线粒体，少量溶酶体。2例患者的细胞浆内有较多粗面内浆网。核呈圆形或卵圆形，可有小切迹，以常染色质为主，有明显的核仁线。1例患者细胞核形态极不规则，但未见较深的核裂隙。
2.2 B-CLL组
优势细胞为成熟一致的小淋巴细胞。细胞约6～8 μm大小，核浆比高。核圆或卵圆，少数细胞核轻度不规则或有切迹，核裂(定义为单一的线性深切迹，不少于核直径的1/3)罕见，异染色质呈团块状聚集，核仁小，往往位于核中心，显隐不一。少量胞浆内含有少数线粒体或溶酶体、少量内浆网；细胞表面光滑，少数有胞膜突起。偶见较为幼稚的淋巴细胞。
2.3 LGLL组
免疫标记示：CD2 48%，CD3 52%，CD4 27%，CD8 14%，CD19 17%，CD22 9%。
光镜形态：骨髓增生明显活跃。异常淋巴细胞占61%，细胞体积较大，胞浆丰富，多数淋巴细胞胞浆内显示突出的嗜苯胺蓝颗粒，颗粒数量不等，散在整个胞浆。核染色质粗糙、聚集，类似正常大淋巴细胞，核仁通常不明显。
电镜形态：淋巴细胞较大，胞浆丰富或中等量，核卵圆，染色质中度聚集，可见核仁。胞浆见少量粗面内浆网、丰富的线粒体、中心体，Golgi区突出。＞60%的淋巴细胞胞浆中有许多电子致密包涵体，包涵体由平行排列的微管束(PTA)构成。TEM下含PTAs的细胞比例、PTAs的大小、数目与光镜下含嗜苯胺蓝颗粒细胞比例、颗粒大小和数量相对应。
2.4 T-PLL组
异常淋巴细胞中等大小，N/C比低，核卵圆形，部分细胞核形不规则，可见切迹或凹陷，染色体聚集程度介于CLL和ALL之间，多数细胞可见明显的囊泡状核仁。胞浆深嗜碱性，散在粗面内浆网和电子密度颗粒。
2.5 HCL组
免疫标记见表1。
表1 HCL和SLVL的免疫表型%
病例 CD19 CD20 CD22 CD11c CD25 CD7 HLA-DR HCL 1 85 - 80 80 62 18 95 2 76 - 68 82 88 - 65 3 52 48 66 35 65 9 80 SLVL 1 69 71 77 31 17 23 90 2 51 - 62 11 8 14 85毛细胞约8～9 μm大小。核圆形或卵圆，常有核切迹，异染色质沿核膜聚集，核仁不明显。胞浆可见多核糖体、少量内浆网、线粒体和溶酶体。所有病例细胞的突出特点是胞浆有许多长的绒毛突起(1.5～2.4μm)，有的呈分支状(图1)。1例患者毛细胞胞浆内见到核糖体板层复合物(RLC)。
2.6 SLVL组
细胞体积略小于毛细胞，N/C比高，核圆或不规则形，约半数细胞可见核仁，染色质较浓密；胞浆细胞器较少，部分细胞见绒毛状突起，常位于细胞两极(图2)。电镜下SLVL与HCL区别见表2。
图1 HCL镜下所见 细胞胞浆边缘不整齐，较多长的绒毛状突起，突起长短不一，直或卷曲，多无分支。胞膜下常可见胞饮小泡，少量电子致密颗粒及线粒体。胞核不甚规则，有较深凹陷
图2 SLVL镜下所见 部分细胞见绒毛状突起，突起数量较少且短，分布欠均匀，胞浆细胞器较少。核卵圆，可见核仁，染色质较浓密
2.7 白血病-淋巴瘤组
2例均为B细胞表型。瘤细胞大小不一，以较大细胞为主。核圆或卵圆，部分细胞核不规则，有核缺或核裂，异染色质呈斑点状或团块状，沿核膜周边聚集，核仁可见；胞浆较丰富，有多少不等的线粒体，可见中心体、纤维丝，偶见颗粒，部分胞膜表面有微绒毛突起。1例患者瘤细胞形态极不规则，有较多伪足和突起。
表2 SLVL与HCL超微形态改变比较
绒毛突起 胞浆细胞器 胞饮囊泡 核周微丝 RLCs 染色质 细胞核 核仁 SLVL 少、短、不分支 少 无 无 无 聚集明显 圆、不规则，可有小切迹 常见 HCL 丰富、长、分支 丰富 有 有 有 较不明显 卵圆、规则，常有切迹 几乎未见2.8 MM组
以幼浆细胞为主。胞核圆形，部分呈偏心位，核仁大而明显，胞浆富含条索状平行排列的内浆网，有扩张的小池，充满电子致密颗粒，Golgi区发达，线粒体较多。
3 讨论
淋巴源性肿瘤起源于不同分化阶段的T、B淋巴细胞，具有多种不同的临床表现和生物学特性，形态学上往往表现出一定程度的多形性，这是由于淋巴细胞不是单一的群体，又可在抗原作用下发生分化的缘故，因而给这类疾病的诊断带来困难。超微检查可较为客观、准确地显示亚细胞结构，有助于诊断和鉴别诊断。
某些淋巴系统肿瘤具备独特的超微结构形态特征已被公认。如，CLL以成熟一致的小淋巴细胞为特征，N/C比高，染色质聚集，细胞器简单。PLL细胞较大，染色质中度聚集，有一突出的囊泡状的核仁。MM以分化不等的浆细胞为主，粗面内浆网是骨髓瘤细胞最具特征的细胞器，数量多而有多种形态和排列。
超微检查有助于识别来自不同B淋巴细胞白血病的细胞，如光镜下难以区别的HCL和SLVL细胞。SLVL是一种罕见的原发于脾脏的慢性B淋巴细胞增殖性疾病，以脾大和外周血中有绒毛淋巴细胞浸润为特征。本病由Melo等于1987年提出，国外报道约100余例，国内于1994年见首例报道〔2〕。典型的绒毛淋巴细胞介于HCL和CLL细胞之间，其特征性表现是胞浆有细小的微绒毛突起，加上N/C高，染色质浓密，易误诊为HCL或CLL。本文结果提示，借助TEM，可以将SLVL与HCL区别开。SLVL淋巴细胞的绒毛突起具有独特的形态特征，且细胞浆内不会出现RLCs等HCL的重要改变。RLCs虽非HCL的特异性改变，但在约半数病例中出现〔3〕，且见于较多的HCL细胞内，故仍具有较高的诊断价值。至于CLL淋巴细胞，TEM下较少淋巴细胞可见绒毛状突起。
通过对细胞器水平的病变的识别，确认某些瘤细胞，如LGLL。近年来LGLL作为一种独立的亚型已获得公认。第4届MIC协作组会议建议用LGLL代替T-CLL〔4〕。本例患者为老年男性，因腹胀、左上腹部包块半年收住院。体检发现浅表淋巴结、脾脏明显增大，外周血淋巴细胞增高，免疫标记符合T细胞亚型。TEM证实光镜下淋巴细胞胞浆中的嗜苯胺蓝颗粒是由平行排列的微管束组成的颗粒结构(PTA)。Robert等〔5〕报道4例LGLL患者，每例至少75%以上的细胞胞浆中可见这种电子致密包涵体，而8例B-CLL患者不到2%的淋巴细胞含有PTAs，因此PTAs常被作为LGLL的形态学特征提及。然而PTAs亦见于正常人、红斑狼疮、类风湿、恶性肿瘤和其他淋巴增殖性疾病患者的淋巴细胞〔6〕，但阳性细胞比例通常很低。PTAs的性质尚不明确，White(1972)推测这种含PTAs的淋巴细胞可能是某一亚型的淋巴细胞的扩张或是细胞生命周期中的某一特殊阶段。参考文献
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2，杨仁池，郝玉书，钱林生，等.伴有毛细胞的脾淋巴瘤——一例报告及文献复习.中华血液学杂志，1994，15：566～567
3，Katayama I,Gary B S.Further ultrastructural characterization of hairy cells of leukemic reticuloendotheliosis.Am J Pathol,1977,86:163～165
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5，Robert W M,Janet P,John H K,et al.Chronic lymphoproliferative disorder with unusual clinical,morphologic,ultrastructural and membrane surface worker characteristics.Am J Med,1977,62:588～590
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